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牛羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2) ELISA试剂盒
货号:80003 | 规格:96T | 价格:¥2200.00 | 品牌:BMASSAY
BMASSAY®牛羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2) ELISA试剂盒灵敏度高、特异性强,高可重现性。
所有BMASSAY品牌ELISA试剂盒,均可享受免费代测服务。

牛羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2) ELISA试剂盒适用于体外定量检测牛血清、血浆、细胞培养上清液和组织等样品中天然或重组的牛羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2) 浓度。如需检测其它特殊样本请咨询我公司。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分。

检测原理
牛羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2) ELISA试剂盒是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA),采用双抗体夹心ELISA法。预先包被的抗体为羟甲基戊二酰辅酶A合酶2(HMGCS2) 单克隆抗体,检测相抗体为多克隆抗体,经生物素(biotin)标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,经PBS或TBS洗涤,随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂盒组成
酶标板 、标准品、浓缩生物素化抗体 、浓缩酶结合物(ABC)、酶结合物(ABC)稀释液 、抗体稀释液 、标准品稀释液 、样品稀释液、浓缩洗涤液(25×) 、显色剂 A 、显色剂 B 、终止液

需自备物品
1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片,570nm或630nm校正波长滤光片) ;
2. 洗板机(可调注液量,保证每孔350μl洗液而不溢出);
3. 高精度单道加液器(量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl);
4. 高精度多道加液器(8道或12道,量程为50-300μl);
5. 37℃恒温箱;
6. 低温离心机;
7. 纯净水或蒸馏水。

标本收集注意事项
1. 收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管;
2. 血清和血浆避免使用溶血、高血脂标本;
3. 标本应清澈透明,悬浮物应离心去除;
4. 标本收集后若不及时检测,需按一次使用量分装,冻存于-20℃,-80℃冰箱内,避免反复冻融;
5. 可根据标本的实际情况,做适当倍数稀释(建议做预实验,以确定稀释倍数) ;
6. 收集标本,尽量做到双份的用量,避免一次实验失败,重复实验时标本缺失,从而耽误实验进程;
7. 收集标本时,应该做好防护措施(比如戴手套,口罩,护目镜等),因为所有标本都具有一定的潜在危险性;
8. 样本处理应该在生物安全柜里面,并且正确使用生物安全柜。

标本处理
1. 血清:将采集的全血静置冰箱4℃过夜,然后1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存;
2.血浆:用EDTA,枸橼酸钠,肝素等作为抗凝剂,加入血液混匀后,1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存;
3. 组织匀浆:切取组织块,0.01M PBS中过洗一次;按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例,在冰水中匀浆。匀浆完成后,5000-10000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存;
4. 细胞培养上清:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃(3-6个月)保存;
5. 尿液,腹水,脑脊液等:1000-3000rpm离心10分钟,取上清立即测试,暂时不测可以放入-20℃(1-3个月)或-80℃3-6个月)保存;
注 样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量,决定适当的稀释倍数,以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

注意事项
1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品,其他成分不可冻结;
2.浓缩生物素化抗体、浓缩酶结合物体积小,运输中颠簸和可能的倒置,会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟,以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底;
3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,使结晶完全溶解后再配制洗涤液;
4.实验过程中,冻干标准品为一次性使用,不得分装。因其浓度较低,溶解两小时候后,会迅速失活;
5.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用;
6.配制试剂时,要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂,充分混匀对测试结果尤为重要,最好使用微量振荡器(使用最低频率),如无微量振荡器,可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟,例如做圆周动作,使加入孔中的反应液混匀;
7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作,并在使用前充分预热;
8.ELISA实验中标准品和样本检测时建议作复孔;
9.应将未用的酶标板放回原铝箔袋中,置2-8℃保存;
10.显色液对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下;
11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中;
12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,波长应该设置为450nm和630nm;
13.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸,使用时必须注意安全;
14.各步骤加样均应使用加样器,并经常校准其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样;
15.每次试验测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n);
16.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性;
17.以洗板机洗板时,每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时, 用带纸屑的吸水材料应慎重, 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应;
18.用终止液终止反应后,请于10分钟内读取OD值;
19.进行复孔实验时,结果计算一定要求平均值;
20.标本溶血可能会有假阳性结果,因此溶血标本不宜进行此项检测;
21.实验时,应该将加过样品的板条放于密闭盒内,并保持湿度约60%左右;
22.为保证恒温箱内的温度为37℃,恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定;

准备工作
1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温后方可进行试验;
2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回 ;
3. 标准品: 加入标准品稀释液1.0ml至冻干标准品中,静置10分钟,待其充分溶解后,轻轻混匀,之后在管身标注①,然后根据需要进行稀释注意:务必要保证冻干标准品彻底溶解和混匀。
4. 标准品稀释方法: 取7支洁净的试剂管,分别标注②,③,④,⑤,⑥,⑦,⑧.  每管加入300μl标准品稀释液。从第①管内取出300μl加入到第②管,混匀后,再从第②管取出300μl加入到第③管,以此类推至第⑦管。第⑧管为标准品稀释液,作为阴性对照使用。
5. 生物素化抗体工作液:按当次试验所需用量,用抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100),配置成生物素化抗体工作液。使用前30分钟准备,仅供当日使用;
6. 酶结合物工作液:按当次试验所需要用量,用酶结合物稀释液稀释浓缩酶结合物(1:100),配置成酶结合物工作液。使用前30分钟准备,仅供当日使用;
7. TMB显色工作液:在使用之前30分钟,按TMB显色液A x 9份加TMB显色液B x 1份(9:1)的比例配制TMB显色工作液。

洗涤方法
1. 自动洗板机:要求注入的洗涤液为350μl,注入与吸出间隔20-30秒。确保机器运用熟练后,再投入实验中使用;
2. 手工洗板:每孔加洗涤液350μl,静置30秒后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干。手工洗板时,注意加入洗液的过程中,不要造成孔间污染,从而出现跳孔的现象。

操作步骤
1. 从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条,未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃;
2. 预留空白孔(若使用双波长读板,空白孔可以不设);
3. 分别将标本或不同浓度的标准品(0ng/mL孔加标准品稀释液)加入相应孔中(100μl/孔), 37℃孵箱孵育90分钟;
4. 提前30分钟制备生物素化抗体工作液;
5. 洗板2次;
6. 加入生物素化抗体工作液(100μl/孔),37℃孵箱孵育60分钟;
7. 提前30分钟制备酶结合物工作液。室温避光放置;
8. 洗板3次;
9. 除空白孔外,加入酶结合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱,避光孵育30分钟;
10. 洗板5次;
11.加入TMB显色工作液(包括空白孔)100μl/孔,37℃孵箱,避光孵育,当标准曲线高浓度的颜色较深,有明显的颜色梯度的时候,即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟;
12.加入终止液(包括空白孔)100μl/孔,混匀后即刻测量OD(450nm)值(10分钟内)。

结果判断
1.每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值(若不减零孔值,标准曲线的零孔应相交于Y轴);
2.手工绘制标准曲线:以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3进行结果计算;
3.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

操作程序总结
1.准备试剂,样品和标准品;
2.加入准备好的样品和标准品,37℃反应90分钟 ;
3.洗板2次,加入生物素化抗体工作液,37℃反应60分钟;
4.洗板3次,加入ABC工作液,37℃反应30分钟;
5.洗板5次,加入TMB显色液,37℃反应;
6.加入TMB终止液;
7.10分钟之内酶标仪测OD值;
8.计算标本待测因子含量。

试剂盒参数
【检测范围】咨询;
【灵 敏 度】咨询;
【特 异 性】系统和其它因子无交叉反应;
【批 间 差】≤12%;
【批 内 差】≤8%;
【回 收 率】70-110%;
【保    存】-20℃ [短期内(如两周)可4℃;
【用    途】用于体外定量分析液体标本(通用型);
【效    期】12个月(-20℃)

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