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昆虫基因组DNA提取试剂盒
R3850 BMASSAY
1000.00 / 50T
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产品说明 / Product Overview:


该昆虫基因组DNA提取试剂盒采用独特的裂解液能够有效除去多糖多酚等,能够从昆虫、软体动物、节肢动物、蛔虫等样品中提取DNA,保存在醇类的样品也适用于本试剂盒的提取。一次操作可以处理小于50mg组织,样品经裂解液消化,氯仿分离除去大部分的多糖多酚,再经分离柱进一步纯化,便可得到高纯度的DNA。所得的DNA可以用于PCR,Southern杂交,酶切消化等实验。

试剂盒组分:
                                   
准备工作:
1. 准备65℃水浴;无水乙醇;氯仿;制冰机;1.5ml离心管;2ml离心管
2. 按照标签所示在缓冲液IB中加入异丙醇,在DNA Wash Buffer中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后常温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液IL,缓冲液IB是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。

操作步骤:
如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在常温下离心。

1. 液氮充分研磨样品。
2. 收集研磨成粉末的50 mg样品,置于1.5ml离心管中。
3. 加入350 μl 65℃预热的缓冲液 IL,并加入20μl 蛋白酶K剧烈地漩涡振荡,确保所有的组织团都分散均匀。
4. 65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。
5. 加入350 μl氯仿,充分混匀,12,000 rpm (~13,400×g )  离心5分钟。
6. 小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。
7. 加入4 μl RNase A,涡旋混匀。常温放置2min。
8. 加入等体积的 缓冲液 IB(请确保已经按照标签加入异丙醇),充分混匀。如:向300 μl上清中加入300 μl 缓冲液 IB。 
9. 把上述混匀的液体转移到吸附柱CG上。10,000×g离心1 min以结合DNA,弃去滤出液体。纯化柱最大容量为750 μl,如果混合液大于750 μl,请分两次过柱。
10. 将吸附柱重新套回收集管中,加入500μl 缓冲液WB至柱子中,10,000×g离心1min,倒弃流出液;
11. 将吸附柱重新套回收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer(请确保已经按照标签加入无水乙醇)至柱子中,10,000×g离心1 min,倒弃流出液;注意:DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中,使用前须恢复到室温。

12.再加入600μl DNA Wash Buffer(请确保已经按照标签加入无水乙醇)至柱子中,8,000×g离心1 min,弃去流出液;
13. 将吸附柱重新套回2 ml收集管中,最大转速(>13000×g)离心空结合柱1 min以干燥柱子的基质;这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
14. 将柱子置于1.5 ml灭菌离心管,加入50-150μl 65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。常温静置5 min;
15. 常温下,离心(>13000g)1 min,以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。

DNA浓度及纯度检测:
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23 kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。

产品储存:
室温保存,有效期12个月。缓冲液IL与缓冲液 IB可能有沉淀产生,37℃水浴溶解后即可。RNase A和蛋白酶K常温运输,-20℃保存。
 

 

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