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2×CTAB提取缓冲液
B3880 BMASSAY
180.00 / 200ml
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产品说明 / Product Overview:


CTAB,即Hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵,是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

2×CTAB提取缓冲液成分:2%(w/v)  CTAB,100mM  Tris (pH 8.0),20mM  EDTA,1.4 MNaCl,0.2%(v/v) 还原剂(随用随加) 。

操作步骤:
1. 2×即用型CTAB提取液配制:
按照终浓度0.2% (v/v)加入还原剂,如100ml 2×CTAB提取缓冲液中加入0.2 ml 还原剂。加入还原剂后的2×即用型CTAB提取液4℃贮存。
2. 取0.2-0.5克新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。
3. 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中,立即加入0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液,65℃水浴30分钟,间歇混匀。
4. 加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm 离心10分钟。
5. 将上清液转入另一1.5ml离心管中,加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm离心10分钟。
6. 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入0.6倍体积的冰冷异丙醇,轻柔混匀,冰浴30分钟。
7. 12000 rpm4℃ 离心10分钟。
8. 去上清液, 加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,4℃ 12000 rpm 3分钟,吸弃乙醇。
9. 4℃ 12000 rpm 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。
注:沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。
10. 加入30-50μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA,-20℃保存备用。

产品储存:
室温可储存一年;加入还原剂后需4℃储存。

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