使用gDNA消除剂柱或板从细胞和组织中快速纯化总RNA

Features

使用独特的 gDNA 消除剂色谱柱或板高效去除 gDNA（无需 DNA 酶）
使用快速简单的提取方案，在几分钟内获得高质量的总RNA
无酚RNA分离
96 孔格式的高通量处理
适用于敏感应用，如实时 RT-PCR 和 RNA-seq

Product Details

RNeasy Plus 试剂盒是下一代 QIAGEN RNA 提取试剂盒，将高质量的 RNA 纯化与有效的 gDNA 去除与独特的 gDNA
消除剂色谱柱或板相结合。高纯度和高产量的总RNA来自广泛的培养细胞和易于裂解的组织。RNeasy Plus Micro
试剂盒专为有限量的样品而设计，可分离出高达 45 μg 纯总 RNA RNeasy Plus 迷你试剂盒可从单次提取中纯化高
达 100 μg 总 RNA （>200 nt），并具有高效的 gDNA 去除功能。两种试剂盒都可以在QIAcube Connect上实现自
动化，并且可以使用RNAprotect组织试剂或Allprotect组织试剂方便地稳定样品，并使用TissueRuptor II或TossueLyser II或LT系统（单独提供）有效地破坏样品。RNeasy Plus 96 试剂盒用于从 96 孔板中生长的培养细胞中高通量纯化总 RNA。为获得最佳效果，建议将本产品与QIAvac 96系统一起使用。
RNeasy Plus Mini标准协议也可以使用TRACKMAN Connected系统执行，并与Gilson的PIPETMAN M Connected移液器配对。
TRACKMAN Connected系统可指导研究人员完成RNeasy Plus Mini协议，同时自动调整支持蓝牙的PIPETMAN M Connected移液器设置。

Performance性能

使用 RNeasy Plus Micro 和 Mini 试剂盒从细胞和组织中提取 RNA，可为敏感应用提供高、可重复的 RNA 产量和高效的基因组 DNA
 消除（参见附图“有效细胞基因组 DNA 去除”、“有效组织基因组 DNA 去除”、“高、可重复的 RNA 产量”和“阵列就绪 RNA”").
安捷伦 RIN 值接近 10 的总 RNA 通常从组织和培养细胞中获得。

RNeasy Plus Micro 和 Mini 试剂盒还为 mRNA 提供富集，因为大多数 RNA <200 核苷酸（如 rRNA 和 tRNA）都被排除在外。为了从培养的细胞中分离出含有小RNA（例如miRNA）的总RNA，
可以使用其他RNA分离方案，并在RNeasy Plus Micro手册中进行了描述，并作为RNeasy Plus Mini试剂盒的单独补充方案。
RNeasy Plus 96 试剂盒与各种细胞系兼容，可纯化安捷伦 RIN 值接近 10 的高质量 RNA（见图“高质量 RNA”）。该试剂盒可完全去除基因组DNA（见图“有效基因组DNA去除”）可在高
灵敏度应用中进行特异性转录本检测，例如低丰度靶标的定量、实时RT-PCR分析。此外，从102到106个细胞的可靠RNA纯化允许在很宽的动态范围内进行实时RT-PCR定量（见图“可靠的RNA纯化”）。

Principle原则

RNeasy Plus程序将QIAGEN用于双链DNA选择性结合的创新技术与成熟的RNeasy技术相结合。保证高质量RNA的高效纯化，无需额外的DNA酶消化。纯化的RNA随时可用，非常适合对低量DNA污染敏感的下游应用，例如定量、实时RT-PCR。
首先在含有高度变性的胍 - 异硫氰酸酯缓冲液RLT Plus中裂解和匀浆细胞和易于裂解的组织，其立即灭活RNA以确保完整RNA的分离。然后将裂解物通过gDNA消除剂离心柱或gDNA消除剂96板，与高盐
缓冲液结合使用，选择性地有效地去除基因组DNA。加入乙醇为RNA提供适当的结合条件，并将样品施加到RNeasy离心柱或96孔板上。这些专用色谱柱和96孔板含有二氧化硅膜，可特异性结合裂解细胞
中的RNA。
对于脂肪和难以裂解的组织，建议使用RNeasy Plus通用套件。为了分离总RNA，包括来自其他样品类型的miRNA，我们推荐miRNeasy试剂盒。

Procedure程序

RNeasy Plus Micro Kit 可纯化来自多达 5 x 105 个细胞或 5 mg 组织的总 RNA，而 RNeasy Plus Mini Kit 可从多达 107 个细胞或 30 mg 组织中分离出总 RNA。较短的工作流程可在不到25分钟
的时间内分离出具有基因组DNA的DNA分离（参见流程图RNeasy Plus程序）。首先对样品进行裂解和均质化。裂解物通过gDNA消除器离心柱，将乙醇加入流通池中，并将样品施加到RNeasy离心柱中。
RNA与膜结合，污染物被冲走。使用RNeasy Plus微量试剂盒在低至14μl水中洗脱高质量的RNA，或使用RNeasy Plus迷你试剂盒洗脱30μl水。


不同的起始材料有不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样品的裂解和均质化。一旦将样品应用于gDNA消除剂离心柱，方案是相似的。该过程为mRNA提供了富集，因为大多数RNA<200核苷酸
（如rRNA和tRNA）都被排除在外。
当在缓冲液RLT Plus（随RNeasy Plus迷你套件一起提供）中破坏和均质组织时，可能会发生过度发泡。在开始破坏和均质化之前，通过向缓冲液RLT Plus中添加试剂DX（单独供应）可大大减少这种
发泡。试剂 DX 已经过试剂盒的仔细测试，对 RNA 纯度或下游应用没有影响。
通过使用 RNeasy 96 板实现高通量 RNA 纯化。在应用于RNeasy 96板之前，细胞裂解物首先通过gDNA消除器96板（见图“RNeasy Plus 96程序”）。gDNA 消除器 96 板使用离心机（离心机 4-16）
方便地进行处理。使用RNeasy 96板纯化RNA是手动的，包括3个简单的步骤：结合，洗涤和洗脱。使用离心机（离心机 4-16 和板转子 2 x 96）或真空 （QIAvac 96） 和离心机的组合对板材进行快
速方便的处理。使用离心机处理板时，最多可使用 2 x 106 个细胞作为起始材料，而在使用真空和离心机处理板时，最多可使用 1 x 106 个细胞。该过程为mRNA提供了富集，因为大多数RNA<200核
苷酸（如rRNA和tRNA）都被排除在外。可以修改RNeasy Plus程序，以允许从培养的细胞中纯化含有小RNA（如miRNA）的总RNA。

Applications应用

使用 RNeasy Plus 试剂盒纯化的 RNA 非常适合对低量 DNA 污染敏感的下游应用，例如 RNA-seq 和定量实时 RT-PCR。纯化的RNA也可用于其他应用。
RNeasy Plus Micro Kit 适用于小样品，包括：
激光显微切除冰检
细针抽吸
RNeasy Plus 96 试剂盒易于以 96 孔形式纯化 RNA，因此非常适合在以下领域进行高通量基因表达分析：
药物筛选
生物医学研究