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多克隆抗体的格式、应用、浓度及存储-ABI
2020-12-28 2352 分享到:

多克隆抗体的格式

由于价格和性能的原因,多克隆抗体通常是实验室应用中选择的试剂。Affinity Biologics提供了广泛的针对止血相关蛋白的抗体。尽管ABI确实提供了一些鼠类单克隆抗体,但大多数抗体都是在绵羊和山羊体内产生的多克隆抗体。由于多克隆抗体包含针对抗原上多个识别位点(表位)的抗体,因此抗原-抗体相互作用的表观亲和力和亲和力非常高。这导致更高的敏感性,并且还意味着在变性或蛋白水解加工后更容易识别抗原。这些是应用的重要考虑因素,例如变性凝胶(例如SDS-PAGE)的免疫印迹以及固定细胞和组织的免疫组织化学。多克隆抗体非常适合用于需要高灵敏度的免疫测定,并且通常是免疫沉淀技术和活性中和测定的首选试剂。在ABI,我们使用固定在树脂上的多克隆抗体从柠檬酸盐血浆中特异性免疫去除靶蛋白并从这些树脂中回收靶蛋白,并具有出色的活性恢复,取得了成功。

大多数Affinity Biologicals抗体有几种不同的形式,每种形式的提纯水平都不同。

完整IgG是基本水平的产物,是指使用多个沉淀和透析步骤从抗血清(通常是绵羊或山羊)中纯化的IgG抗体。IgG的纯度通常为90%,并在含有50%甘油(v / v)的HEPES缓冲盐水溶液中提供。滴度与起始抗血清基本相同,每个小瓶通常含有从一毫升抗血清中回收的IgG量。此级别的产品通常用于免疫沉淀,免疫电泳,免疫耗竭和活性中和测定等应用。

亲和纯化的IgG是使用固定抗原进一步纯化的抗体。亲和纯化是一种富集过程,其中整个IgG都经过已与抗原共价连接的树脂。将非反应性抗体洗掉,并在破坏抗原-抗体相互作用的条件下洗脱特异性抗体。结果是非常高纯度的产品,其滴度明显高于完整IgG。此水平的产品旨在用于诸如免疫印迹,细胞免疫染色和几种类型的免疫测定等应用,在这些应用中,需要使用这种富集的产品实现更高的信噪比。

酶标记的IgG是完整IgG或亲和纯化的IgG,已与辣根过氧化物酶偶联作为报告酶。这些产品旨在用作标记的一抗,用于免疫测定和免疫印迹等应用中。


多克隆抗体应用

多克隆抗体通常识别蛋白质抗原上的许多结合位点,它们共同产生非常高的亲和力结合常数。在许多情况下,抗原在变性和非变性条件下均被识别。通常,多克隆抗体可以很好地发挥作用的应用包括:

  • ELISA(直接,双重抗体或竞争性)

  •  凝胶沉淀(免疫电泳,免疫扩散)

  •  中和抗原活性

  •  免疫亲和色谱法消耗抗原

  •  SDS-PAGE的免疫印迹(蛋白质印迹)

  •  免疫染色(ImmunoHistoChemistry)

  •  流式细胞仪

应当注意,尽管我们的许多抗体可能都适合上述应用,但作为产品质量控制和批准的一部分,每批抗体都仅进行直接ELISA和凝胶沉淀测试。除非另有说明,否则ABI将仅保证在直接ELISA和凝胶沉淀应用中的性能。

ELISA、免疫印迹和免疫组织化学应用的抗体浓度范围

对于任何特定应用,抗体的最佳浓度将根据抗体形式和使用的检测方法而有所不同。ABI强烈建议最终用户对每种抗体进行滴定,以确定每种特定应用的最佳工作浓度。但是,根据我们的经验,我们可以就抗体浓度范围提出一些一般性建议,这些建议可以用作优化分析条件的起点。


下表仅包含一般建议,可能并不适用于我们的所有产品。

FormatImmunoblotting (ECL detection)ELISA (capture)ELISA (detecting)
Whole IgG (IG)5-25 ug/ml20-50 ug/mlNA
Affinity-Purified (AP-IgG)0.5-5 ug/ml10 ug/mlNA
IgG Peroxidase (HRP)5 ug/mlNA10 ug/ml
AP-IgG Peroxidase (AP-HRP)1 ug/mlNA2 ug/ml


多克隆抗体存储–处理建议

所有抗体产品均以5%的过量体积分配。

在HBS甘油溶液(10mM HEPES,0.15M NaCl,pH 7.4、50%甘油(v / v))中提供ABI抗体,以提高IgG的长期稳定性。甘油通过减少水合作用来稳定IgG,还有助于抑制微生物的生长。我们建议在-10°C至-20°C之间储存。在这些温度下,溶液将不会冻结。HBS-甘油溶液可从药瓶中多次撤药,而无需进行许多降低抗体效力的冻融循环。我们建议将小瓶加热至环境温度,并在移液前轻轻混合以降低粘度。抗体在微量离心管中提供,可通过短暂离心从壁和盖上收集残留试剂。


通常,我们可以根据客户要求将任何一种抗体透析到任何缓冲液中。订购10瓶或更少的样品时,将收取购买价格20%的特殊手续费。