日本JaICA高灵敏8-OHdG Check ELISA试剂盒（Code: KOG-HS10E）适用于尿液、血清和细胞样品，本文针对8-OHdG检测前的血清/血浆样品的预处理程序做介绍（点击这里查看组织/细胞培养样品的预处理程序）。

血清/血浆样品8-OHdG检测需要预处理

8-OHdG ELISA试剂盒可能会受到诸如蛋白质之类的高分子量物质的影响。为了在包含蛋白质的血清/血浆或尿液中准确检测到8-OHdG，需要从样品液中去除蛋白质。这是通过超滤方法预处理样品的一个例子。

举例

请准备截留分子量为10kDa的超滤器，例如Microcon YM-10（产品目录号42407，Millipore）。如果将300 µL血清加到Microcon YM-10过滤器上，则大约需要10分钟。可获得200uL的滤液。请将滤液用于高灵敏度的8-OHdG Check ELISA。请注意，正常人血清中的8-OHdG浓度可能较低（0.1-0.3 ng / mL），在某些情况下，血清8-OHdG会低于检测极限（<0.125 ng / mL）。

准备Microcon YM-10（产品目录号42407，Millipore）。

将YM-10过滤器在蒸馏水中浸泡8-12小时，然后按照说明手册进行洗涤。如果分子截止值为10 kDa，则可以使用Microcon YM-10以外的其他超滤器。请参考制造商的协议。

从水中取出过滤器，并从过滤器外部除去水滴。

将300 µL蒸馏水倒入过滤器单元。

要清洁过滤器，请以10,000G离心20分钟。

将过滤器倒置。

通过冲洗（例如，以1,000G冲洗3分钟）除去过滤器上的水滴。

将300 uL血清或血浆倒入过滤器单元中。请注意不要倒入超过300 µL，因为在某些情况下，渗余物可能会从过滤器的侧壁漏出。

请注意不要弄干清洗过的过滤器

在10,000 G下离心50分钟。可获得150-200 µL滤液。

离心过程中温度应保持在20°C以下。

将滤液应用于高灵敏度的8-OHdG Check ELISA。如果需要稀释，请使用磷酸盐缓冲盐水（PBS pH7.4）作为稀释剂。

采样

采集血液后，请尽快准备血清或血浆，因为活性氧可以从活化的血细胞中释放出来。请在20分钟内开始离心以与血细胞分离。

血清或血浆样品可在-20°C下保存。对于长期存储，请存储在-80°C。避免冻结和解冻循环。样品预处理应在分析当天进行。

应用于其他生物液体（恢复测试）

在几乎所有情况下，如果如上所述对样品进行了正确的预处理，则在测量正常人的血清，血浆和尿液样品中的8-OHdG时就不会出现问题。但是，如果您打算将其应用于唾液等其他生物液体，或应用于动物模型的样本，我们建议通过恢复测试来测试准确性。

回收测试：

1）请在以下样品中测量8-OHdG。

[基础样品]：将9体积的样品与1体积的PBS混合。

[8-OHdG]：将9体积与1体积的8-OHdG标准溶液（10 ng / mL）混合。

[混合样品]：将9体积样品与1体积8-OHdG标准溶液（10 ng / mL）混合。

2）通过以下公式计算回收率。

回收率（％）=（[混合样品]-[基础样品]）/ [8-OHdG]

回收率（％）预计在80％至120％之间。

故障排除

1）如果恢复测试的结果超出80％-120％，请使用PBS（pH7.4）将滤液稀释2-4倍。

2）如果ELISA结果不稳定，请一式三份（N = 3）。请参考8-OHdG ELISA的技术信息。

人血清8-OHdG的测定实例

健康人为0.1-0.3 ng / mL，肾脏疾病患者为0.7 ng / mL。

在某些情况下，结果将低于检出限（<0.125 ng / mL）。

参考文献

1)Suzuki K, et. al.: The relationship between smoking habits and serum levels of 8-OHdG, oxidized LDL antibodies, Mn-SOD and carotenoids in rural Japanese residents. J Epidemiol 13(1), p29-37 (2003)

2)Michael J Forlenza and Gregory E Miller: Increased serum levels of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine in clinical depression. Psychosomat Med 68, p1-7 (2006)

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