大鼠ITGA3 ELISA试剂盒

检测原理:

BMASSAY®大鼠ITGA3 ELISA试剂盒基于双抗体夹心ELISA(Sandwich ELISA)酶联免疫吸附测定技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)。抗大鼠ITGA3单克隆抗体已预包被在酶标板上，样品和生物素化抗体先后加入酶标板孔反应后，经PBS或TBS洗涤，随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应，经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂盒组分:

预包被96孔板(12 x 8 well strips)

标准品

浓缩生物素化抗体

浓缩酶结合物(ABC)

酶结合物(ABC)稀释液

抗体稀释液

标准品稀释液

样品稀释液

浓缩洗涤液(25×)

显色剂A

显色剂B

终止液

需自备物品：

1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ；

2. 洗板机；

3. 移液器；

4. 37℃恒温箱；

5. 低温离心机；

6. 纯净水或蒸馏水。

标本收集:

1. 收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管；

2. 血清和血浆避免使用溶血、高血脂标本；

3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除；

4. 标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃冰箱内，避免反复冻融；

5. 可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) ；

6. 收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程；

7. 收集标本时，应该做好防护措施；

8. 样本处理应该在生物安全柜中进行。

标本处理:

1. 血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

2. 血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

3. 组织匀浆：切取组织块，0.01M PBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

4. 细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

5. 尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存；

注意事项:

1．试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结；

2．浓缩生物素化抗体、浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底；

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶完全溶解后再配制洗涤液；

4．实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活；

5．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用；

6．配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀；

7．实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热；

8．ELISA实验中标准品和样本检测时建议作复孔；

9．应将未用的酶标板放回原铝箔袋中，置2-8℃保存；

10．显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下；

11．超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中；

12．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm；

13．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全；

14．各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样；

15．每次试验测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n）；

16．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性；

17．以洗板机洗板时,每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时, 用带纸屑的吸水材料应慎重, 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应；

18．用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值；

19．进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值；

20．标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；

21．实验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右；

22．为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定；

检测原理:

BMASSAY®大鼠ITGA3 ELISA试剂盒基于双抗体夹心ELISA(Sandwich ELISA)酶联免疫吸附测定技术(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)。抗大鼠ITGA3单克隆抗体已预包被在酶标板上，样品和生物素化抗体先后加入酶标板孔反应后，经PBS或TBS洗涤，随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应，经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂盒组分:

预包被96孔板(12 x 8 well strips)

标准品

浓缩生物素化抗体

浓缩酶结合物(ABC)

酶结合物(ABC)稀释液

抗体稀释液

标准品稀释液

样品稀释液

浓缩洗涤液(25×)

显色剂A

显色剂B

终止液

需自备物品：

1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ；

2. 洗板机；

3. 移液器；

4. 37℃恒温箱；

5. 低温离心机；

6. 纯净水或蒸馏水。

标本收集:

1. 收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管；

2. 血清和血浆避免使用溶血、高血脂标本；

3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除；

4. 标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃冰箱内，避免反复冻融；

5. 可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) ；

6. 收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程；

7. 收集标本时，应该做好防护措施；

8. 样本处理应该在生物安全柜中进行。

标本处理:

1. 血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

2. 血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

3. 组织匀浆：切取组织块，0.01M PBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

4. 细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；

5. 尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存；

注意事项:

1．试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结；

2．浓缩生物素化抗体、浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底；

3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶完全溶解后再配制洗涤液；

4．实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活；

5．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用；

6．配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀；

7．实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热；

8．ELISA实验中标准品和样本检测时建议作复孔；

9．应将未用的酶标板放回原铝箔袋中，置2-8℃保存；

10．显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下；

11．超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中；

12．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm；

13．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全；

14．各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样；

15．每次试验测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n）；

16．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性；

17．以洗板机洗板时,每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时, 用带纸屑的吸水材料应慎重, 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应；

18．用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值；

19．进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值；

20．标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；

21．实验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右；

22．为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定；