人抗双链DNA(dsDNA)抗体(IgG) ELISA试剂盒
产品特性
| 规格 | 价格 |
|---|---|
| 96 Tests | ￥3120.00 |
| 3 x 96 Tests | ￥咨询 |
| 5 x 96 Tests | ￥咨询 |
详细介绍
该人抗双链DNA(dsDNA)抗体(IgG) ELISA 试剂盒适用于体外定量检测人血清、血浆和细胞培养上清液等样品中的dsDNA Ab (IgG)浓度。
检测方法：Sandwich ELISA(Quantitative)
样本类型：Serum, plasma, Cell culture supernatant
反应物种：人
检测目标：dsDNA Ab (IgG)
样本量：50-100 µl
读数：450 nm
特异性：经检测与其它相似物质无明显交叉反应
检测范围：0.312 ng/ml - 20 ng/ml
灵敏度：最小可测值<0.06ng/ml
批内差：CV<8%
批间差：CV<12%
回收率：75-110%
储存条件：2-8℃,6个月。
检测原理
该试剂盒是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)，采用双抗原夹心 ELISA 法。酶标板预先包被 有双链 DNA 相关抗原，检测相抗原为双链 DNA 相关抗原。样品和抗原先后加 入酶标板孔反应后，经PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反 应;经过 PBS 或 TBS 的彻底洗涤后用底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催 化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待 测因子呈正相关。
原理示意图
需自备物品：
1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ；
2. 洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）；
3. 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl)；
4. 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl)；
5. 37℃恒温箱；
6. 低温离心机；
7. 纯净水或蒸馏水。
标本收集：
1. 收集血液的试管应为一次性的无热原、无内毒素试管；
2. 血清和血浆避免使用溶血、高血脂标本；
3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除；
4. 标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃冰箱内，避免反复冻融；
5. 可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) ；
6. 收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程；
7. 收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），因为所有标本都具有一定的潜在危险性；
8. 样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。
标本处理：
1. 血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；
3. 组织匀浆：切取组织块，0.01M PBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；
4. 细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存；
5. 尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存；
注：样品稀释的一般原则：
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。
操作步骤
1. 从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回 铝箔袋内封存于 2-8°C;
2. 预留空白孔(若使用双波长读板，空白孔可以不设);
3. 分别将标本或不同浓度的标准品(0ng/mlL 孔加标准品稀释液)加入相应孔 中(100μl/孔)，37°C孵箱孵育 90 分钟;
4. 提前 30 分钟制备抗原工作液; 5. 洗板2次;
6. 加入抗原工作液(100μl/孔)，37°C孵箱孵育 60 分钟;
7. 提前 30 分钟制备酶结合物工作液，室温避光放置;
8. 洗板3次;
9. 除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)，37°C孵箱，避光孵育 30 分钟; 10.洗板 5 次;
11.加入 TMB 显色工作液(包括空白孔)100μl/孔，37°C孵箱，避光孵育，当标 准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应 请勿超过 30 分钟;
12.加入终止液(包括空白孔)100μl/孔，混匀后即刻测量 OD(450nm)值(10 分钟内)。
